Diagnostik Molekuler: real-time PCR

Saat ini, mekanisme diagnostik molekuler dirancang polymerase chain reaction (PCR), yang merupakan dorongan untuk pengembangan sejumlah besar metode diagnosis penyakit, berdasarkan penentuan materi genetik. Untuk melaksanakan real-time PCR menggunakan fragmen gen (khususnya asam nukleat) dari agen penyebab, yang tidak ditemukan pada individu lainnya.

Prinsip PCR adalah perkalian dari jutaan DNA patogen fragmen tertentu kali oleh polimerase DNA dalam unit khusus, disebut sebagai pengendara sepeda termal, yang menyediakan pengulangan siklik dari rezim suhu untuk program tertentu.

Diagnostik PCR memungkinkan untuk mengulang serangkaian amplifikasi, mempertahankan aktivitas enzim. Ketika amplifikasi berlangsung lancar, dalam satu siklus jumlah salinan dari bagian tertentu dari DNA ganda patogen, setelah tiga puluh siklus - seratus sepuluh. Itulah sebabnya PCR digunakan dalam diagnosis untuk menentukan patogen cukup kecil, identifikasi dari yang tidak mungkin tanpa itu.

Perlu dicatat bahwa RNA tidak bisa menjadi template untuk PCR secara real time. Oleh karena itu, untuk mendeteksi RNA virus sebelum amplifikasi untuk mendapatkan DNA berkorelasi dengan fragmen yang sesuai itu. Polymerase chain reaction memungkinkan untuk menghasilkan DNA dan RNA pengukuran patogen. Informasi yang diperoleh digunakan untuk memantau efektivitas terapi dan untuk mengevaluasi prognosis klinis.

Selain itu, real-time PCR tidak memerlukan tindakan tambahan sehubungan dengan dekripsi dari DNA target atau amplikon, yang berfungsi sebagai penghalang untuk diagnosis yang benar dan mengakibatkan hasil yang palsu. Pendekatan ini memungkinkan untuk tidak menggunakan langkah elektroforesis, yang mengarah ke produk pengurangan risiko dari reaksi berantai polimerase. Juga, karena penurunan jumlah manipulasi dengan agen, mengurangi waktu survei, menyederhanakan proses, mengurangi kemungkinan kesalahan. PCR juga memungkinkan Anda untuk menentukan jumlah awal salinan DNA dari patogen dalam percobaan klinis untuk membantu mengidentifikasi periode eksaserbasi dan mengambil tindakan yang tepat waktu untuk menyembuhkan pasien.

Hari ini, ada sejumlah besar metode amplifikasi fiksasi secara real time. Berbagai teknik yang paling umum digunakan merelasikan amplikon berkorelasi dengan probe fluorogenik, intensitas radiasi yang bervariasi tergantung pada akumulasi amplikon dan dicatat secara real time dengan menggunakan perangkat khusus yang disebut thermocycler dengan modul optik. Ini memberikan tingkat tinggi sensitivitas analisis. Pada produk PCR yang sama dapat dideteksi, bersama dengan jumlah besar oleh-produk, pada saat menggunakan elektroforesis dalam beberapa kasus tidak diperhatikan.

Dengan PCR menggunakan positif dan negatif kontrol sampel secara real time. Dengan demikian, sampel positif dan negatif dalam sebuah penelitian dianalisis sebagai sampel terpisah, sampel kontrol dimana diperkenalkan di masing-masing sampel tersebut dan melewati semua langkah analisis.

Hari ini, ada sejumlah besar perangkat untuk melaksanakan reaksi berantai polimerase. Ini termasuk Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid dan Roche. Masing-masing memiliki kelebihan dan kekurangan

Perlu dicatat bahwa PCR - metode diagnosis yang digunakan dalam skala besar ilmiah, penelitian dan pusat diagnostik di seluruh dunia, karena memberikan kesempatan untuk melaksanakan interpretasi langsung dari hasil.